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视听系统

氯化钴（CoCl₂）为经典缺氧损伤诱导剂，通过水体浸泡或玻璃体腔注射可特异性损伤斑马鱼视锥、视杆光感受器细胞，模拟人类视网膜变性、缺血缺氧性视网膜病变。结合斑马鱼视网膜可再生的特性，可同步评价视网膜损伤修复能力，适用于眼科保护与视网膜修复类受试物活性筛选。

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1.实验原理

CoCl₂是经典化学缺氧/细胞毒性诱导剂，通过玻璃体腔注射或水体浸泡，可特异性损伤斑马鱼视网膜光感受器细胞（视锥细胞、视杆细胞），模拟人类视网膜变性、缺血缺氧性视网膜病变等眼科疾病的病理特征；同时斑马鱼具备视网膜再生能力，可同时评价损伤与修复过程。

2.实验目的

（1）构建稳定、可重复的CoCl₂诱导斑马鱼光感受器损伤模型；

（2）评价受试样品（或基因干预）对光感受器损伤的保护作用；

（3）探究dnajb1及相关通路在视网膜损伤修复中的作用机制；

（4）为眼科疾病治疗药物/靶点筛选提供体内评价模型。

3.试验方法

（1）分组设置：

空白对照组：正常饲养，无任何处理；

溶剂对照组：玻璃体腔注射等量无菌生理盐水；

CoCl₂模型组：玻璃体腔注射20 mmol/L CoCl₂溶液；

dnajb1敲除+CoCl₂组：dnajb1敲除斑马鱼，玻璃体腔注射 20 mmol/L CoCl₂溶液；

阳性对照组：CoCl₂造模+视网膜保护药物（如维生素A、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸）；

受试样品组：CoCl₂造模+不同浓度受试样品处理（水体浸泡或腹腔注射）。

（2）取样时间点：

分别在造模后24 h、48 h、72 h、7 d、14 d取样，用于qPCR 检测基因表达、Western Blot 检测蛋白表达、病理学检测

（3）结果指标：

检测 dnajb1、Rhodopsin、Cleaved-Caspase-3、Bax/Bcl-2 蛋白水平，验证基因表达变化。

dnajb1、光感受器相关基因（rho、opn1sw1、opn1lw1）、氧化应激基因（sod1、cat、gpx1）

显微镜下观察视网膜各层结构，重点测量外核层（ONL）厚度、光感受器细胞数量，评价损伤程度。

4.实验结果

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